经 ChIP-qPCR 验证的抗体

蛋白与 DNA 的相互作用介导许多不同的表观遗传过程。研究这些相互作用的研究人员需要一种可靠的方法，来分析它们何时在基因组中发生以及发生在何处。ChIP 被广泛用来分析特定基因和调节基因中的蛋白-DNA 相互作用。ChIP 结合定量 PCR (qPCR) 可以提供一种有效的工具，在较短周转时间内生成关于蛋白- DNA 相互作用的定量实时数据。

一次成功的 ChIP-qPCR 实验需要敏感性、特异性且每次都能提供可重复的结果的抗体。CST 严格地验证了推荐用于 ChIP-qPCR 的抗体，以确保符合生成可靠数据所需的高质量标准。

ChIP-qPCR 抗体验证步骤

• 分析至少两 (2) 个已知阳性和一 (1) 个已知阴性的靶标位点的免疫富集情况，以确定抗体特异性。与已知阴性靶标位点相比，抗体对已知阳性位点必须显示最小富集倍数。
• 使用 CST 的专有组蛋白肽阵列，进一步分析组蛋白甲基赖氨酸和甲基精氨酸抗体的抗体特异性。
• 在抗体与同型对照比较中，分析已知靶标位点免疫富集的信噪比来确定抗体敏感性。抗体必须显示一个预先确定的最小信噪比，即靶标特异性抗体超过同型对照的靶标位点处最小可接受的富集倍数。
• 在 ChIP 实验中，对每种抗体进行滴定来确定最佳性能。抗体太少或太多都不利于靶标位点的免疫富集。
• 通过滴定新批次与前一批次来确定批间可重复性。
• 使用已知阳性与阴性及野生型与敲除型细胞系来评估抗体特异性。
• 使用能诱导胞核定位和/或与靶基因结合的细胞处理法来评估抗体特异性。
• 在多种应用中测定抗体性能，以增强最终用户对抗体特异性的信心。