AQUA 肽
Cell Signaling Technology (CST) 可定制用于验证并量化蛋白质标准品和翻译后修饰的合成同位素标记 AQUA 肽。通过 AQUA 肽,传统同位素稀释策略(定量质谱分析的金标准)可用于蛋白质和翻译后修饰标准品的分析。我们专营高品质定制 AQUA 肽合成,包括具有挑战性的序列和不常见的翻译后修饰。我们拥有数以百计的合成 AQUA 肽储备,并且新 AQUA 肽合成和质量控制的周转期大约为 4 至 6 周。
所设计的每种合成 AQUA 肽的序列与蛋白质提取物的蛋白酶消化生成的细胞肽相同,并且包含至少一个带有替代 C12 和 N14 的稳定同位素 C13 和 N15 的氨基酸残基。除了分子量稍高,AQUA 肽具有与其生物衍生的相对物相同的属性。当添加到生物样品中时,AQUA 肽将与其相应的内源性伴侣肽一同被分离。只有在质谱仪中,内源(“轻”)肽和合成 AQUA(“重”)肽之间的质量差异才会导致二者的分离。
CST 科学家帮助启动了 AQUA 肽技术 (Gerber SA, Rush J, Stemman O, Kirschner MW, Gygi SP (2003) Absolute quantification of proteins and phosphoproteins from cell lysates by tandem MS. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100(12), 6940–5.)。我们和许多其他研究人员定期使用 AQUA 肽来确认和验证新型翻译后修饰位点。AQUA 肽标准品和生物肽的液相色谱 (LC) 中的共洗脱结果是证明生物肽序列分配正确(包括翻译后修饰位点的位置)的有力证据。此外,AQUA 肽 LC 峰面积提供了内源性肽和翻译后修饰位点绝对数量或相对数量的定量测量方法。
AQUA 肽作为翻译后修饰的鉴定标准。上方迹线图是来自 Met 蛋白激酶活化环的胰蛋白酶肽的提取离子色谱图,它对应 Tyr-1234(较早洗脱峰)和 Tyr-1235(较晚洗脱峰)的磷酸化。下方迹线图,是 Tyr-1234 AQUA 肽的提取离子色谱图。共洗脱确认较早的洗脱峰为在 Tyr-1234 磷酸化的肽。
特性和优势
- 基于细胞蛋白质的蛋白水解消化残余物的氨基酸序列对 AQUA 肽进行设计。胰蛋白酶消化产物通常用于 AQUA 肽设计。AQUA 肽可能未经修饰,或可能包含常见的翻译后修饰,如磷酸化、乙酰化、甲基化和泛素化。
- AQUA 肽的合成通常将 C13 和 N15 并入 Leu、Pro、Val、Phe 或 Tyr 残基中。我们可以为您的项目推荐最佳标记策略。
- 通过反相 LC 对所有 AQUA 肽进行纯化,并且通过氨基酸分析对肽原液进行严格量化。
- 如需价格信息,请联系我们,我们还提供大批量购买折扣。
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参考文献
- Gerber SA, Kettenbach AN, Rush J, Gygi SP (2007) The absolute quantification strategy: application to phosphorylation profiling of human separase serine 1126. Methods Mol. Biol. 359, 71–86.
- Gerber SA, Rush J, Stemman O, Kirschner MW, Gygi SP (2003) Absolute quantification of proteins and phosphoproteins from cell lysates by tandem MS. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100(12), 6940–5.
- Kirkpatrick DS, Hathaway NA, Hanna J, Elsasser S, Rush J, Finley D, King RW, Gygi SP (2006) Quantitative analysis of in vitro ubiquitinated cyclin B1 reveals complex chain topology. Nat. Cell Biol. 8(7), 700–10.