PTMScan® Proteomics Technology Video Tutorial

Jeffrey C. Silva, Charles L. Farnsworth, Xiaoying Jia, Matthew P. Stokes, Albrecht Moritz, Ailan Guo, Roberto D. Polakiewicz, Michael J. Comb, Site Discovery Group and PhosphoScan Services Group, Cell Signaling Technology, Inc.

Cell Signaling Technology (CST) 的 PTMScan® 技术结合用于通过使用液相色谱法-串联质谱法 (LC-MS/MS) 进行抗体肽富集的专有方法，可对磷酸化 (PhosphoScan®)、泛素化 (UbiScan®)、乙酰化 (AcetylScan®) 等翻译后修饰 (PTM) 进行定量分析。

PTMScan® Technology 采用 CST™ 基序抗体，将预定义的翻译后修饰肽组与消化细胞提取物中的未修饰肽区分开来。 这种免疫亲和纯化技术与 LC-MS/MS 相结合，以识别和定量修饰肽丰度的变化。 基序抗体可用于特异性结合磷酸化 (Tyr, Ser, Thr)-肽、乙酰化肽或泛素标记的肽，能够对细胞的磷酸化、乙酰化或泛素化状态进行定量分析。

MAPK、mTOR 和 PI3K/Akt 通路是激活致癌受体酪氨酸激酶 (RTK) 下游的关键信号通路。 所有这些通路均激活 AGC 激酶家族成员，包括 Akt、RSK 和 p70 S6 激酶，其蛋白底物在 RxRxxS/T 基序处磷酸化。

在最近由 CST 的科学家撰写的一项磷酸化蛋白质组学研究中 (Sci. Signal. (2010) 24;3(136):ra64)，在三种细胞系中鉴定出这些 AGC 家族激酶的超过 300 种假定底物，每种细胞系由 EGFR、c-Met 或 PDGFR 驱动。 实验方法使用 PhosphoScan® Technology，使用 RxRxxS/T 基序抗体作为亲和试剂来选择性免疫沉淀 Akt、RSK 和 p70 S6 激酶的磷酸化底物。使用针对 PI3K、mTOR 和 MEK 的特异性抑制剂类靶向抗癌药物，能够对这些 RTK 下游的信号网络进行图谱绘制。 其底物包括参与多种细胞功能的蛋白质，涉及支架构建、蛋白质稳定性调控、代谢、转运以及运动性调节等过程。