流式细胞术检测免疫信号转导和表型靶标的实验步骤兼容性表
本实验步骤兼容性表标识了与通用实验步骤协作的表面和细胞内抗体。在页面底部的文本中找到有关内容和导航表格的其他详细信息。
抗体克隆信息和实验步骤兼容性测试
实验步骤概述
| 实验步骤编号 | 实验步骤信息 | 染色制备简介 | 可用的固定透化试剂盒 |
|---|---|---|---|
| 1 | 活细胞表面染色实验步骤 | 染色前无细胞固定或透化的实验步骤 | 不适用 |
| 2 | 固定细胞内染色 – 甲醇透化实验步骤 | 在染色前使用甲醛和甲醇固定和透化细胞 | Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593 |
| 3 | 固定细胞内染色 – Triton™ X-100 透化实验步骤 | 在染色前使用甲醛和 Triton™ X-100 进行细胞固定和透化 | Intracellular Flow Cytometry Kit (Triton™ X-100) #51995 |
| 4 | 固定细胞内染色 – FoxP3/转录因子实验步骤 | 针对转录因子和核蛋白抗体染色的固定和透化缓冲液组 | FoxP3/Transcription Factor Fixation/Permeabilization Kit #43481 |
流式细胞术 - 用于建立多色组合的抗体和实验步骤选择指南
在流式细胞术实验中染色活细胞或固定细胞时，您可以选择很多不同的实验步骤。您的实验步骤必须与用于细胞染色的抗体兼容，以避免对表位识别产生负面影响，同时仍允许抗体进入目的蛋白所在的细胞组分。
例如，磷酸化流式细胞术实验中的细胞内靶标染色要求您在染色前固定并透化细胞。但是，固定 (FIX) 和透化 (PERM) 实验步骤可改变表位与抗体之间的相互作用。透化试剂的选择对于检测中使用的抗体的敏感性、特异性和功能尤其具有显著影响。这可能取决于抗原和克隆。
通常使用甲醇等溶剂或 Triton™ X-100 或皂素等去垢剂实现透化。使用皂素进行的透化最不彻底；它通过结合胆固醇在质膜中形成孔道，但不会通透胞内膜结构，例如核膜或线粒体膜。Triton™ X-100 和甲醇能够充分透化大多数胞内膜，从而提供最彻底的透化。然而，甲醇可能会破坏表位，一些抗体（包括一些表面标记物）在进行甲醇透化后不起作用。
本实验步骤兼容性表标识了与通用实验步骤协作的表面和细胞内抗体
Cell Signaling Technology® (CST) 提供与不同荧光染料偶联的经流式细胞仪验证的抗体的多样化目录。我们已将此通过流式细胞术的免疫信号转导和表型的实验步骤兼容性表整合在一起，以帮助您快速识别 CST 目录中哪些染色实验步骤和抗体兼容，尤其是在选择多个抗体，在多重组合中用于信号流式细胞术时。特别的是，该表将帮助您理解：
- 哪种表面标记抗体（CD 标记）仅与活细胞实验步骤兼容
- 哪些 CD 标记在通常用于细胞内染色流式细胞术的固定-透化实验步骤中有效
- 哪些固定-透化 (fix-perm) 实验步骤与 fix-perm 兼容抗体配合使用
- 哪些抗体只用于 fix-perm 实验步骤，以及适用于哪些实验步骤
浏览实验步骤兼容性表
抗体克隆信息列出 CST 抗体克隆、表位位置以及用于实验潜在抗体的物种反应性信息。
实验步骤兼容性测试确定每个抗体克隆测试了哪些最常用的实验步骤，以帮助您节省配伍组合的时间。在选择抗体进行多重分析时，您将要确保每个克隆都与同一实验步骤兼容。绿色标记表示建议使用实验步骤，黄色标记表示实验步骤已经过测试，但可能性能下降，因此建议进一步的实验步骤优化，红色标志表示该抗体不建议用于特定实验步骤，白色标记表示尚未测试实验步骤。
可用偶联物列出了每个克隆可从 CST 获得的偶联抗体产品，从左到右按照相应荧光基团的大最大发射光进行排序。点击产品货号链接，了解有关重要特定抗体偶联物的更多信息。