SignalStar® mIHC 检测组合设计
在开始之前
SignalStar Multiplex IHC 技术使用特定的一抗和荧光检测试剂标记 FFPE 组织样品中的细胞蛋白。它使您能够使用经过高度验证的抗体组合同时定量多个靶标，以进行空间生物学实验。
SignalStar Multiplex IHC Panel Builder 可自动进行检测组合设计，消除了将抗体与荧光团配对的猜测，以确保准确性。在四个基本步骤中，您可以选择靶标物种、抗体、荧光团和成像序列来快速轻松地设计实验。或者，您可以选择物种和抗体，并让自动化检测组合构建器指导您完成其余的工作。
确认您的仪器兼容性
- SignalStar Multiplex IHC 实验步骤可以在您的实验台上手动执行，也可以在 Leica Biosystems 的 BOND RX 自动染色机上自动执行。有关仪器要求的更多详细信息，请参阅实验步骤。
- 考虑荧光成像仪器的光谱特性，以获得最佳效果并避免光谱渗透。
- 如果您的最终检测组合除了 DAPI 之外还包含所有四 (4) 个荧光信道，那么您需要确认您的荧光成像仪器可以根据以下参数专门检测和分离这些信道：
荧光团信道 | 激发光波长 (nm) | 发射光波长 (nm) | 激光线 | 常用滤光片组 |
488 | 488 | 520 | 488 | FITC |
594 | 590 | 618 | 561/594 | 德克萨斯红 |
647 | 650 | 668 | 594/633 | Cy®5 |
750 | 752 | 776 | 633 | Cy®7 |
如何设计 SignalStar Multiplex IHC 检测组合
第 1 步：选择靶标物种
SignalStar Multiplex IHC 抗体经过验证，确认与指定物种具有特异性反应性。并非所有抗体对所有物种都有效。
第 2 步：选择抗体
针对您的目的标记物，选择 3-8 种经验证的抗体。与所有 CST® 抗体一样，确定用于 SignalStar 检测组合的抗体均经过单独验证，可用于其预期应用。因此，它们保证能够按预期发挥作用，并为您提供可靠、可重复的结果。
如果您没有看到您的靶标作为 SignalStar 偶联物，可以在检测组合构建器中选择一抗，然后添加 SignalStar® 二抗，以改为使用未偶联、经 IHC 验证的抗体。请注意，SignalStar 二抗只能用于第一轮成像。
第 3 步：查看和编辑检测组合构建器结果
检测组合构建器可自动设计 mIHC 组合，将抗体与荧光团配对，并以固有的准确性和效率进行成像。您可以查看并确认检测组合构建器结果，或选择编辑以更好地控制您的实验设计。
设计您自己的 Multiplex IHC 检测组合时的注意事项
第 4 步：确认您的订单
您的实验所需的所有抗体和缓冲液套装将自动添加到您的购物车中。您可以继续在检测组合构建器中多次添加组合。只是要小心，不要将之前已经放入购物篮中的检测组合移除。
SignalStar mIHC 工作流程
图 1. SignalStar mIHC 检测可同时在 FFPE 组织中标记多达 8 个靶标。脱蜡且再水化的 FFPE 组织切片首先经过抗原修复 (A)，然后在一步一抗孵育步骤中混合添加针对您所选靶标数目（最多 3-8 种寡核苷酸偶联抗体）的所有抗体 (B)。带荧光染料（信道：488、594、647 和 750）的互补寡核苷酸在第一轮成像中通过形成与抗体偶联的寡核苷酸-荧光基团的复合物，从而放大多达 4 种寡核苷酸偶联抗体的信号 (C-D)。如果检测靶标的数量大于 4，则需要柔和移除第一轮成像的寡核苷酸和荧光团 (E)，接着进行第二轮放大以可视化多达 4 种额外的寡核苷酸偶联抗体 (F)。随后，通过专有软件或开源软件对这两张图像进行计算对齐与融合，以生成 8 标染色图像 (G)。
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Cell Signaling Technology、CST 和 SignalStar 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。Cy 是 GE Healthcare 的注册商标。所有其他商标均为各自所有者专有。访问 /legal/trademark-information，了解更多信息。
美国专利号 10,781,477、国外等效专利和从中衍生的子专利。